Diagnosis of Cryptococcosis: Comparison of Various Methods to Detect Cryptococcus Neoformans

Abstract

The diagnosis of cryptococcal meningitis may be difficult to establish when few organisms are present in the cerebrospinal fluid. For this reason, we determined which of several different visual and cultural methods were the most sensitive for the detection of Cryptococcus neoformans. Gram stain and India ink preparations required that 10 5 organisms per ml be present before these methods were reliably positive; centrifugation increased the sensitivity of these assays 10-fold. Culturing a loopful of the sample required that 10 3 organisms per ml be present to yield growth; centrifugation of the sample enhanced the sensitivity of the culture by 100-fold. Clearly the most sensitive assays, both detecting fewer than 1 organism per ml, were culture of a membrane filter through which the entire sample had been passed and culture of the entire sample in a flask using biphasic medium. Zusammenfassung : Die Diagnose der Crytococcus-meningitis kann Schwierigkeiten bereiten, wenn nur wenige Erreger im Liquor cerebrospinalis vorhanden sind. Aus diesem Grunde wurden Untersuchungen durchgefÜhrt urn festzustellen, welche optische oder kulturelle Methode die hÖchste Nachweisempfindlichkeit fÜr Cryptococcus neoformas besitzt. Die GramfÄrbung und die Aufschwemmung in chinesischer Tube benÖtigen 10 5 Zellen/ml um verlÄßlich positive Befunde zu ergeben. Durch Zentrifugierung des Liquors konnte die Empfindlichkeit auf das 10-fache gesteigert werden. Bei der Abimpfung einer vollen ImpfÖse war es erforderlich, daß das Untersuchungsmaterial mindestens 10 3 Organismen/ml enthielt, damit in der Kultur Wachstum entstand. Mit der Zentrifugierung des Materials wurde die Empfindlichkeit bei dieser Methode auf das 100-fache erhÖht. Als empfindlichste Nachweismethoden erwiesen sich die Membranfiltermethode, bei der die gesamte Probe filtriert und anschließend kultiviert wird, sowie die Kultivierung der gesamten Probe in einer Kulturflasche mit biphasischem NÄhrmedium. Mit beiden Methoden lassen sich weniger als ein Organismus/ml entdecken.